松葉豬毛菜瞬時轉化體系的建立及初步驗證

作者：夏春蘭,李亞楠,聞志彬

摘要：松葉豬毛菜(Salsola laricifolia)是典型的荒漠C3-C4中間型植物,隸屬于藜科(Chenopodiaceae)豬毛菜屬,是研究C4途徑進化以及光呼吸減少機制的最佳物種。以松葉豬毛菜無菌苗為試驗材料,通過農桿菌介導的瞬時轉化方法,分別對質粒載體、苗齡、農桿菌侵染濃度、侵染時間和乙酰丁香酮濃度進行研究,探究各因素對松葉豬毛菜植株瞬時遺傳轉化效率的影響,以確立最佳的瞬時轉化體系;并在上述體系的基礎上,過表達松葉豬毛菜葉綠體型NADP-蘋果酸酶基因(SaNADP-ME1),通過GUS組織化學染色和熒光定量PCR驗證瞬時轉化效果。結果表明:(1)采用pCAMBIA1301構建表達載體,以30 d苗齡植株作為轉化受體,在侵染液中添加200μmol·L^-1乙酰丁香酮,農桿菌菌液OD600為0.8,侵染6 h條件下,瞬時轉化效率最佳(92%);(2)構建過表達載體并瞬時轉化松葉豬毛菜植株,通過染色檢測到GUS活性,并且熒光定量PCR檢測到SaNADP-ME1的表達量相比對照組顯著增高,該基因成功瞬時過表達轉化至植株中。綜上所述,本試驗在松葉豬毛菜植株中建立了一種快速基因功能驗證方法,為以后研究松葉豬毛菜功能基因奠定了基礎。

發文機構：中國科學院新疆生態與地理研究所 中國科學院大學 石河子大學生命科學學院

關鍵詞：松葉豬毛菜(Salsolalaricifolia)瞬時轉化農桿菌侵染法SaNADP-ME1Salsola laricifoliatransient transformationAgrobacteriumGUS histochemical stainingSaNADP-ME1

分類號： Q943.2[生物學—植物學]