鹽澤螺旋藻藻藍蛋白裂合酶CpcS的分子克隆及功能研究

作者：盛怡,李慧敏,伍賢軍,楊紅,朱詠莉,李萍萍

摘要：為研究鹽澤螺旋藻(Spirulina subsalsa)藻藍蛋白裂合酶CpcS的催化功能,首先通過PCR技術從S. subsalsa FACHB351基因組DNA中擴增藻藍蛋白裂合酶的編碼基因SscpcS,構建表達質粒pCDFDuet-SscpcS,然后再與脫輔基蛋白和色素合成酶表達質粒pETDuet-SscpcB-Ssho1::SspcyA共同轉入大腸桿菌BL21(DE3),并經IPTG(Isopropyl β-D-Thiogalactoside,異丙基硫代半乳糖苷)誘導重組合成藻藍蛋白。PCR產物測序表明SscpcS擴增成功;雙酶切檢測和SDS-PAGE電泳分析表明質粒pCDFDuet-SscpcS構建成功,且能表達目的蛋白。重組藻藍蛋白PCB-CpcB細胞產物為深藍色;純化后的色素蛋白展現620 nm的最大吸收峰和646 nm的最大熒光發射峰;色素蛋白通過鋅離子染色,在紫外線照射下展現明顯熒光。該研究成功克隆源自鹽澤螺旋藻的藻藍蛋白裂合酶SsCpcS的編碼基因,其表達產物SsCpcS能有效催化藻藍蛋白的生物合成。此研究為S. subsalsa藻藍蛋白的重組合成及抗氧化試劑的研制奠定基礎,也為探明鹽澤螺旋藻中CpcS的催化機理提供科學依據。

發文機構：南京林業大學生物與環境學院 南京林業大學江蘇省南方現代林業協同創新中心

關鍵詞：鹽澤螺旋藻裂合酶藻藍蛋白重組表達生物合成Spirulina subsalsalyasesphycocyaninrecombinant expressionbiosynthesis

分類號： Q71[生物學—分子生物學]