藏豬興奮性氨基酸轉運載體EAAC1基因的克隆與原核表達

作者：傅德智,孔祥峰,楊煥勝,褚武英,李鐵軍,印遇龍

摘要：興奮性氨基酸轉運載體EAACl是腸道內谷氨酸的主要載體。本研究根據人的基因編碼區設計一對特異性引物，以藏豬空腸總RNA為模板，通過RT—PCR獲得一長約1600bp的cDNA片段，T／A克隆后測序，并進行序列分析；將該基因片段連接到原核表達載體pET-32a（＋）中構建融合表達質粒，轉化到EcoliBL21（DE3）中進行表達。測序結果顯示，獲得的cDNA全長為1575bp，編碼524個氨基酸；EAACl分子量為57kD，等電點為5．34，GenBank登錄號為GQ375513；該蛋白質具有3個N-糖基化位點、8個蛋白激酶c磷酸化位點和1個cAMP／cGMP依賴性蛋白激酶磷酸化位點，含有7個跨膜結構域和一個信號肽序列；SDS—PAGE電泳檢測結果表明，表達蛋白質與預期蛋白質大小一致。上述結果為講一步研究EAAC1的功能屜其調摔蕈窄了甚礎．

發文機構：中國科學院亞熱帶農業生態研究所 亞熱帶農業生態過程重點實驗室/湖南省畜禽健康養殖工程技術研究中心 中國科學院研究生院 長沙大學生物工程與環境科學系

關鍵詞：藏豬興奮性氨基酸轉運載體序列分析原核表達Tibetan pigexcitatory amino acid carder 1sequence analysisprokaryotic expression

分類號： Q781[生物學—分子生物學]Q786[生物學—分子生物學]