草魚呼腸孤病毒GCRV 096 VP7蛋白的表達及免疫原性

作者：楊碩,陳靜妮,胡海浩,王雅,閆秀英,簡紀常

摘要：【目的】研究草魚呼腸孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)096 vp7基因的原核和真核表達及其編碼蛋白的免疫原性。【方法】應用RT-PCR技術獲得GCRV 096 vp7基因,構建GCRV 096 vp7基因原核表達載體pET-VP7,用原核表達的GCRV 096 VP7蛋白免疫草魚(Ctenopharyngodon idellus)15 d后,用GCRV 096和GCRV GD108分離株對其攻毒,檢測GCRV 096 VP7的免疫原性。構建GCRV 096 vp7基因真核表達載體p EGFP-N3-VP7,分析其在草魚CIK細胞中的表達。【結果與結論】GCRV 096 vp7基因的開放閱讀框ORF (GenBank登錄號為JN206665)為831 bp,編碼276個氨基酸。成功構建GCRV 096 vp7基因原核表達載體pET-VP7,并在大腸桿菌BL21中誘導表達成功;最優表達條件是0.2 mm/L IPTG、28℃下表達5 h,通過HisTrap HP柱純化融合蛋白,Western blot分析結果表明,所表達的蛋白為目的蛋白。經免疫及GCRV攻毒后,GCRV 096(Ⅰ型)免疫組vp7基因的表達水平降低(P <0.05),而GCRV GD108(Ⅱ型)免疫組vp7基因的表達無顯著差異,表明GCRV 096 VP7蛋白對GCRV096具有良好的免疫效果,但對GCRVGD108無明顯的免疫效果。成功構建GCRV096vp7基因真核表達載體pEGFP-N3-VP7,Western blot分析結果表明,GCRV 096 VP7蛋白在草魚腎(CIK)細胞中成功表達。

發文機構：廣東海洋大學水產學院//廣東省水產經濟動物病原生物學及流行病學重點實驗室//水產經濟動物病害防控廣東普通高校重點實驗室

關鍵詞：草魚呼腸孤病毒VP7基因表達免疫原性Grass carp reovirusvp7 geneexpressionimmunogenicity

分類號： Q78[生物學—分子生物學]Q959.46[生物學—動物學]